應(yīng)用
高含量組分測定-示差法
當待測組分含量較高時，測得的吸光度值常常偏離朗伯-比爾定律。即使不發(fā)生偏離，也因為通常采用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤海ㄆ胀ü舛确ǎ?，使測得的吸光度太高，超出適宜的讀數(shù)范圍而引入較大的誤差。采用示差法就能克服這一缺點。但應(yīng)用示差法時，要求儀器光源有足夠的發(fā)射強度或能增大光電流放大倍數(shù)，以便能調(diào)節(jié)參比溶液透光度為100%。
這就要求儀器單色器質(zhì)量高，電光學(xué)系統(tǒng)穩(wěn)定性好。
多組分分析
應(yīng)用紫外可見分光光度法，常?？赡茉谕辉嚇尤芤褐胁贿M行分離而測定一個以上組分。假定溶液中同時存在兩種組分x和y，其吸收光譜一般有重疊和不重疊兩種情況。不重疊的測定組分相互不產(chǎn)生干擾。若吸收光譜重疊，在波長為λ1和λ2時分別測定吸光度A1和A2，由吸光度值的加和性得到聯(lián)立方程，通過解聯(lián)立方程求得各濃度值。
定量方法
標準曲線法
即工作曲線法，適用于大量重復(fù)的樣品分析，是工廠控制分析中應(yīng)用最多的方法。
根據(jù)光吸收定律，對于一種有色化合物，ε是一個定值，若把光程L也固定，那么吸光度A就和溶液的濃度c成正比，也就是說吸光度A和濃度c呈線性關(guān)系。配制一系列適當濃度的標準溶液，顯色后分別測定其吸光度，把吸光度A對濃度c作圖，即得工作曲線。
直接比較法
直接比較法其實質(zhì)也是工作曲線法，是一種簡化的工作曲線法。配一個已知被測組分濃度為cs的標樣，測其吸光度為As，在同樣條件下再測未知樣品的吸光度為Ax，通過計算可求出未知樣品的濃度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性質(zhì)相同，比色皿厚度一樣，所以As/Ax=cs/cx
式中：
cs-已知被測組分的濃度，mol/L；
cx-未知樣品的濃度，mol/L；
As-已知被測組分的吸光度；
Ax-未知樣品的吸光度。
直接比較法簡化了繪制工作曲線的步驟，適用于個別樣品的測定。
操作時應(yīng)注意配制標樣的濃度要接近被測樣品的濃度，這樣能減少測量誤差。
標準加入法
標準加入法是工作曲線的一種特殊應(yīng)用。選擇適當?shù)娘@色條件，先測定濃度為cx的未知樣品吸光度為Ax，再向未知樣品中加入一定量的標樣，配置成濃度為cx+Δc1、cx+Δc2……一系列樣品，分別顯色后再測定吸光度為A1、A2……最后在坐標紙上繪圖，以吸光度A為縱坐標，以濃度c為橫坐標，分別畫出Δc1、Δc2所對應(yīng)的A1、A2等各點，連成直線后延長，與橫軸的交點cx也就是未知樣品的濃度cs。
應(yīng)用標準加入法時要注意，加入的標樣濃度要適當，使畫出的曲線保持適當角度，濃度過大或過小都會帶來測量誤差。這種方法操作比較麻煩，不適于作系列樣品分析，但它適用于組成比較復(fù)雜，干擾因素較多而又不太清楚的樣品，因為它能消除背景的影響。
紫外可見分光光度計使用中的注意點
保護光源
光源燈有一定的壽命，儀器不工作時不要開燈，若工作間歇時間短，可不關(guān)燈。
一旦停機，則要待燈冷卻后再重新啟動，并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時，就及時更換。
經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無水乙醇去除。
保證合適的工作環(huán)境
溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降。造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等。甚至使儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。實驗室，特別是地處南方地區(qū)的實驗室，應(yīng)具備四季恒溫的儀器室，配備恒溫設(shè)備。環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電耦合器的可靠性，也是造成光學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
定期除塵、調(diào)校
儀器使用一定時間后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑，最后恢復(fù)原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校和記錄。
正確使用比色皿
拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。清洗比色皿時，先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液（1:2）浸泡片刻，再用水沖洗。每次做完實驗應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細軟的吸水紙吸干，以保護透光面。測定有色溶液吸光度時，一定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。在測定一系列溶液的吸光度時，通常都按由稀到濃的順序測定，以減少測量誤差。
若分光光度計噪音比較大，有可能是光源燈泡使用時間超過壽命期，可更換光源燈泡。
若自檢時提示波長自檢出錯，有可能是自檢過程中打開過儀器樣品室的蓋子，可關(guān)上儀器樣品室蓋子，重新自檢。
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